熒光原位雜交簡介

1、定義

熒光原位雜交(fluorescent in situ hybridization,FISH) 是一種細胞遺傳學技術,可以用來對核酸進行檢測和定位。熒光標記的核酸探針只和具有高度相似性的核酸雜交,可用于染色體上基因的定位,或在分子生態學中用來標記不同分類細菌或古菌中的核糖體RNA。 

    

2、原理

FISH(fluorescence in situ hybridization)技術是一種重要的非放射性原位雜交技術。它的基本原理是:如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的,二者經變性-退火-復性,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛,可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應,經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。


3、意義

原位雜交的探針按標記分子類型分為放射性標記和非放射性標記。用同位素標記的放射性探針優勢在于對制備樣品的要求不高,可以通過延長曝光時間加強信號強度,故較靈敏。缺點是探針不穩定、自顯影時間長、放射線的散射使得空間分辨率不高、及同位素操作較繁瑣等。采用熒光標記系統則可克服這些不足,這就是FISH技術。FISH技術作為非放射性檢測體系,有以下特點。


4、優點

1、熒光試劑和探針經濟、安全;
2、探針穩定,一次標記后可在兩年內使用;
3、實驗周期短、能迅速得到結果、特異性好、定位準確;
4、FISH可定位長度在1kb的DNA序列,其靈敏度與放射性探針相當;
5、多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列;
6、既可以在玻片上顯示中期染色體數量或結構的變化,也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結構。 


5、缺點

不能達到100%雜交,特別是在應用較短的cDNA探針時效率明顯下降。